La Real Cédula de 1563, dictada el 29 de agosto por el rey Felipe II separó la Gobernación del Tucumán de la gobernación de Chile y la traspasó a la Audiencia de Charcas, señalando que "Habemos acordado apartar la dicha gobernación de Tucumán, Juríes y Diaguitas de la dicha gobernación de Chile e incluirlas en el distrito de la dicha audiencia de Las Charcas". Con el nacimiento de la Audiencia de Buenos Aires en 1663, el territorio de Tucumán sería traspasado a su jurisdicción.
La Real Cédula de 1570 a favor del adelantado Juan Ortiz de Zárate modificó los límites meridionales de la Gobernación del Río de la Plata 200 leguas hacia el sur, desde el paralelo 36º 57' hasta el 48º 21', pero no mencionaba cuáles eran los límites occidentales. Esta omisión se subsanó un siglo después, cuando la Real Cédula de 1669 señala que desde el paralelo 37°S, la frontera entre ambas entidades es la Cordillera de Los Andes.
Las primera vez que se publicaron explícitamente los límites de la Real Audiencia de Chile, fue en una Real Cédula de 17 de febrero de 1609 del rey Felipe III e incluida en la Recopilación de las Leyes de los Reinos de Indias de 1680. Dicha recopilación señala que la extensión territorial de la Gobernación del Río de la Plata abarcaba "todas las ciudades, villas y lugares y tierra que se comprenden en las provincias del Río de la Plata, Paraguay y Tucumán, no embargante que hasta ahora hayan estado debajo del distrito y jurisdicción de Charcas". La jurisdicción de la Audiencia de Santiago de Chile fue fijada en la recopilación como: "...la que tenga por distrito todo el Reino de Chile; hasta el Estrecho de Magallanes; y la tierra adentro, hasta la provincia de Cuyo; inclusive".
Los proyectos de segregación de Cuyo fueron combatidos por el Cabildo de Santiago desde al menos 1765. El año 1775 se envió al rey un memorial redactado por Manuel de Salas. En éste se declaraba como indisoluble las entidades de Chile y Cuyo, y de prosperar la inclusión de la Provincia de Cuyo al Virreinato del Río de la Plata se le pedía que se incorpore, también, a él todo el reino de Chile. Los intentos chilenos finalmente se verían frustrados tras la Real Cédula del 27 de octubre de 1777, en la que se declara constituido el Virreinato del Río de la Plata y bajo su jurisdicción "los territorios de las ciudades de Mendoza y San Juan del Pico que estaban a cargo de la gobernación de Chile".
En el Archivo general de Indias se conserva un manuscrito del primer delineador del Depósito Hidrográfico de la Corona de España, teniente de navío Andrés Baleato, fechado aproximadamente en 1803. Este documento contiene la descripción geográfica del Virreinato del Río de la Plata y termina con tres notas, en la segunda de las cuales se puede leer:
En la costa septentrional del Estrecho de Magallanes está el Morro de Santa Águeda o Cabo Forward, desde el cual corre hacia Norte la Cordillera de los Andes y divide a la tierra patagónica en oriental y occidental. La oriental siempre se consideró del Virreinato de Buenos Aires hasta el Estrecho de Magallanes, sin embargo de no tener más establecimientos que hasta el Río Negro y la Guardia de la Bahía de San José. La Patagonia occidental pertenecía al Reino de Chile hasta el mismo Estrecho de Magallanes, no obstante que las conversiones de indios no pasaban de lo más Sud del Archipiélago de Chiloé con algunas entradas que hacían los misioneros en el Archipiélago de Guaytecas o de Chonos. La tierra del Fuego no tuvo establecimientos ni conversiones pertenecientes a Buenos Aires ni a Chile y su separación del continente por el Estrecho de Magallanes hacía imaginaria su pertenencia
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